Defencin

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1 Dipartimento di Medicina Interna, Istituto per la medicina complementare, Ospedale universitario di Zurigo, Raemistrasse 100, 8091 Zurigo, Svizzera. katarina. hostanska@access. uzh. ch Citazione J Ethnopharmacol. 2011 Mar 24; 134 (2): 228-33. doi: 10.1016 / j. jep.2010.12.006. Epub 2010 Dec 16 anni. astratto SCOPO DELLO STUDIO: uno speciale estratto etanolico acquoso da sette piante medicinali tradizionali (BNO 1030) è stato utilizzato per decenni per trattare le infezioni ricorrenti delle vie respiratorie. Considerando il ruolo potenziale di interleuchina-8 (IL-8) e beta umano defensina-2 (hBD-2) in infiammazione, abbiamo studiato l'effetto di BNO 1030 sul lipopolisaccaride (LPS) da Pseudomonas aeruginosa o IL-1β-indotta mediatori infiammatori in A549 tipo umano II cellule epiteliali alveolari. MATERIALI E METODI: cellule A549 sono state stimolate con LPS (100 mcg / ml) o IL-1β (50 ng / ml) in presenza della preparazione e la secrezione di IL-8 e hBD-2 sono stati misurati dopo 18 he 24 h in surnatanti cell free con metodica immunoenzimatica (ELISA). la vitalità delle cellule e la crescita cellulare è stata studiata da ioduro di propidio assorbimento e WST-1 test, rispettivamente. RISULTATI: BNO 1030 inibito la secrezione di IL-8 e hBD-2 a concentrazioni non citotossiche (0,1-100 mg / ml; concentrazione inibente la crescita cellulare, il 50% (IC (50)) = 678 ± 87,6 mg / ml). Stimolazione da IL-1β portato ad un'attivazione 7 volte di IL-8 secrezione, che è stata ridotta del 37,7 ± 4,1% (p & lt; 0,05), dopo incubazione con 100 ug / ml BNO 1030. inducibile hBD-2 è stata soppressa da 91,8 ± 15,6% (p & lt; 0.01) alla stessa concentrazione di BNO 1030 (IC (50) = 0,7 ± 0,1 mg / ml). L'aumento di 2 volte di IL-8 secrezione dalle cellule LPS-stimolati stato completamente abolita ad una concentrazione di 50 ug / ml BNO 1030 (IC (50) = 5,7 ± 3,6 mg / ml). CONCLUSIONI: BNO 1030 soppressa la secrezione di IL-8 e hBD-2 in cellule A549 epiteliali in coltura. Questi risultati supportano il suo uso come un prodotto fitoterapico preparato da rimedi tradizionali in malattie infiammatorie, soprattutto a carico dell'apparato respiratorio. Copyright © 2010 Elsevier Ireland Ltd. Tutti i diritti riservati. PMID 21167927 [PubMed - indexed for MEDLINE] Testo intero L'espressione di un β-defensine mRNA, linguale Antimicrobial Peptide, nei bovini mammaria tessuto epiteliale è indotta da mastite ASTRATTO L'espressione di un β-defensine, il peptide antimicrobico linguale (LAP), in risposta alla mastite è stata studiata mediante real-time PCR di RNA da quartieri mammella mastitic e controllo. C'era una relazione positiva tra la conta delle cellule somatiche nel latte e LAP espressione. L'ibridazione in situ ha dimostrato che LAP mRNA era espresso nelle cellule epiteliali di tessuto mastitic. Questi risultati suggeriscono che LAP svolge un ruolo nella risposta immunitaria innata alla mastite. mastite bovina, causate da patogeni batterici o fungini e determinando un elevato livello di cellule somatiche nel latte, è una delle malattie a base di latte più costose mondo, compromettendo sia la produzione di latte e la qualità di elaborazione (7. 8). fagociti costituiscono una parte importante del meccanismo di difesa della ghiandola mammaria bovina contro gli agenti patogeni della mastite che causano (4. 12). Tuttavia, poco si sa circa l'attività antimicrobica di altri composti espressi all'interno della ghiandola mammaria bovina. Defensine contribuiscono alla risposta immunitaria innata e sono efficaci contro una varietà di microrganismi (6). L'espressione di RNA β-defensine varia in cellule epiteliali, con i più alti livelli che sono in quei tessuti che sono costantemente esposti a, e colonizzata dai, microrganismi (3. 15). Di recente, la presenza di recettori Toll-like 2 e 4 e di un gene che codifica β-neutrofili sono stati segnalati defensin 5 per essere up-regolata in risposta alla mastite all'interno della ghiandola mammaria bovina (2). Il peptide antimicrobico linguale (LAP) è un membro della famiglia di β-defensine e è stato isolato da infiammata dell'epitelio lingua bovina (13). Successive indagini hanno trovato espressione LAP diffusa in intestinale bovina infetta e dei tessuti delle vie respiratorie (15). Qui abbiamo esaminato l'espressione del LAP nella ghiandola mammaria bovina per determinare se questo β-defensine svolge un ruolo nella difesa immunitaria innata nel corso di una infezione mammaria. tessuto mammario è stato ottenuto da otto vacche da mastite (Tabella 1). Tre mucche erano naturalmente presenti infezioni (mucche da 1 a 3). Lo stato di infezione è stato determinato mediante analisi somatiche latte conteggio delle cellule (SCC) e l'analisi batteriologica (14). Nella vacca da 4 a 8, la mastite è stata indotta con un ceppo selvatico di Streptococcus uberis (isolato da una mucca con mastite clinica) infondendo 1.000 a 1.500 UFC attraverso i capezzoli in due quarti. Le mucche sono stati osservati per segni clinici di mastite, evidente gonfiore e proteine ​​aggregati nel latte. Alveolare, cisternal e tessuti periferici è stata presa post mortem dal quarto infetto e un quarto noninfused di controllo entro 24 ore dopo l'identificazione di mastite clinica (Tabella 1). La regione periferica è stata definita come 1 a 2 cm sotto lo strato di tessuto connettivo nelle regioni esterne della ghiandola mammaria. campioni di fegato e globuli bianchi sono stati prelevati da mucche sane libere di mastite. RNA totale è stato estratto utilizzando TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, Calif.) E convertito in cDNA utilizzando il sistema di sintesi del primo filamento SuperScript per PCR in tempo reale (Invitrogen). Circa 5 ng della miscela di reazione di sintesi di cDNA è stato utilizzato per l'amplificazione PCR quantitativa. I primer sono stati progettati per la regione codificante LAP (114 bp) e ripetere regione 4 di polyubiquitin bovina (201 bp) (Tabella 2). Amplificazione, la rilevazione e l'analisi in tempo reale sono stati eseguiti utilizzando il sistema di rilevazione di sequenza ABI Prism 7700 (Applied Biosystems, Foster City, Calif.). SYBR Green I (Applied Biosystems) è stato utilizzato per la rilevazione del prodotto amplificato. Il programma di cicli termici era 95 ° C per 10 minuti seguiti da 40 cicli di 95 ° C per 15 s, 60 ° C per 30 s, 72 ° C per 30 s, e 78 ° C per 10 s. Dopo ogni esperimento in tempo reale, le curve di dissociazione sono stati eseguiti per garantire che c'era un solo prodotto e che non dimeri di primer erano presenti. C'è stata una significativa (P & lt; 0,001) relazione positiva tra il valore di log-normalizzato per SCC e l'espressione LAP in tutte e tre le regioni della ghiandola mammaria (Fig. 1). Questa relazione è stata calcolata montando una pendenza comune del grafico per l'espressione log LAP SCC log (Fig. 1) dalle mastitic e controllo ghiandole delle otto vacche (la specifica di vacche è un effetto casuale) utilizzando REML (Genstat per di Windows 2002, versione 6.1, 6 ° ed .; VSN International Ltd. Oxford, Regno Unito). L'aumento della SCC di 10 volte, che corrisponde a log (SCC) in aumento di 1, è associato ad un aumento di 0,78 ± 0,098 in log (LAP, alveolari) o un aumento di 6 volte in giro (95% intervallo di confidenza, 3.8 a 9.4). L'incremento dei log (LAP, cisternal) è stato 0,66 ± 0,083, che indica un aumento di 4,5 volte del LAP (95% intervallo di confidenza, 3,1-6,7), e l'aumento di log (LAP, periferica) è stato 0,68 ± 0,087, che indica un 4.8-fold aumento di LAP (95% intervallo di confidenza, 3,2-7,1). genica LAP non è stato rilevato in bianco cellule del sangue o campioni di fegato (dati non mostrati). In accordo con i dati provenienti da altri tessuti malati (13. 15), espressione di mRNA LAP aumentato nel tessuto infetto da tutte le regioni all'interno della ghiandola mammaria. L'esposizione a lipopolisaccaridi o citochine infiammatorie è stato anche dimostrato di aumentare l'espressione di mRNA LAP nelle cellule epiteliali tracheali bovina (11). Questo aumento LAP mRNA era indipendente dell'organismo infettante. Tuttavia, tutti i batteri in questo studio erano gram positive. Non abbiamo dimostrato che LAP mRNA aumenta con una infezione gram-negativi, ma è stato dimostrato in precedenza di esporre attività antimicrobica contro i batteri gram-negativi (13), e alcuni defensine neutrofili hanno attività antimicrobica contro gli organismi gram-negativi isolati da mucche mastitic (1). tessuto infetto e non infetto da mucche 2 e 3 sono stati utilizzati per l'ibridazione in situ per determinare l'mRNA espressione specifica delle cellule di LAP. campioni di tessuto istologici sono stati fissati ed inclusi in cera Paramat (Laboratory Supplies BDH, Dorset, Regno Unito). Sezioni seriali (7 micron di spessore) sono state tagliate e montate su vetrini da microscopio Polysine rivestite (Biolab scientifici, Auckland, Nuova Zelanda). Una sequenza di 220 bp cDNA è stato isolato tramite real-time PCR con primer a regioni conservate di beta-defensine da allattamento tessuto mammario bovino. La sequenza primer forward utilizzato per questo isolamento era 5'-TTCGGTACCGACAGCATGAGGCTCC, e la sequenza primer reverse era 5'-TGACTCCGCATCCAGTCTGGCCACG (dati non pubblicati). La sequenza di cDNA isolato era identica alla sequenza pubblicata bovina LAP nucleotide (database nucleotide NCBI Entrez, numero di adesione S76279). Senso e antisenso 35 S-UTP (Amersham) riboprobes sono stati preparati da plasmidi linearizzati cDNA contenenti la sequenza LAP e ibridizzati con sezioni di tessuto montati secondo metodi pubblicati (9). Ibridazione della sonda antisenso LAP 35 S-etichetta rilevata espressione di LAP all'interno delle cellule epiteliali mastite colpite. espressione abbondante di LAP mRNA era situato nei rivestimenti duttali della tettarella e cisterna di quarti mastitic (Fig. 2A a C), suggerendo che l'espressione LAP mRNA è indotta nel sito di infezione, in quanto questi tessuti sarebbero i primi esposti a invadere microrganismi. Questi risultati si estendono quelli di studi precedenti, che hanno mostrato l'espressione del capezzolo e altri tessuti duttale di lattoferrina, un noto componente antimicrobico nel latte (10). espressione di mRNA LAP è stato rilevato nel epitelio dal cisternal, alveolari, e le regioni periferiche dei tessuti infetti. Al contrario, l'espressione di mRNA LAP non è stato rilevato nelle sezioni di tessuto non infetti (dati non riportati). LAP mRNA è stato rilevato in alcune cellule secretorie alveoli (Fig. 2D ed E), ma l'espressione era limitata alle cellule alveolari che visualizzati evidenti segni di infiammazione, come la presenza di neutrofili nel lume alveolare o in alveoli regredita. Nessun segnale potrebbe essere rilevato quando questi tessuti sono stati ibridati con la sonda di controllo LAP senso (Fig. 2F). Nessuna espressione è stata rilevata nel tessuto secretoria da quarti non infetti (dati non riportati). LAP è espresso all'interno di entrambe le cellule epiteliali di rivestimenti duttali e alveoli. Questa osservazione supporta i dati in tempo reale PCR che mostrano che il tessuto alveolare ha il più alto livello di LAP nella ghiandola mammaria. La sonda LAP cDNA non ibridare a leucociti, confermando quindi la sonda specificità nelle nostre condizioni sperimentali. Questa scoperta suggerisce che la trascrizione LAP è indotta infezione seguito, in quanto non era presente a livelli rilevabili in lattazione cellule alveolari o alveoli senza leucociti nel loro lumen. Espressione dei LAP mRNA all'interno dell'epitelio secretorio suggerisce il rilascio del LAP sulla superficie epiteliale ed eventualmente nel latte, simile a quanto avviene con β-defensin-1 nel latte umano (5). In questo studio, abbiamo dimostrato l'espressione inducibile mammaria di LAP nelle cellule epiteliali mammarie in risposta alla mastite. Questi risultati indicano un ruolo per LAP nella risposta immunitaria contro la mastite nella bovina. I livelli di espressione genica LAP in tre regioni della ghiandola mammaria bovina in ciascuna delle otto mucche. quantità normalizzato LAP mRNA nei singoli trimestri mammella per tutte le vacche sono tracciate. Ciascun punto è rappresentato da un simbolo con linee che collegano campioni di tessuto non infetti e infetti da ogni mucca. La pendenza della linea rappresenta la correlazione tra l'espressione genica di registro LAP e log SCC. (A) del tessuto alveolare; (B) del tessuto cisternal; (C) periferico tessuto. Come prendere un Defensive Corso di guida in linea in Texas Ci sono due ragioni principali maggior parte delle persone prendono un corso di guida difensiva in Texas - riduzione del tasso di licenziamento biglietto e l'assicurazione. corsi di guida difensiva hanno il compito di ultime sei ore, e così molte persone sono ora scelgono di seguire il corso on-line. 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La prova di una patente di guida valida Texas tassa amministrativa Corte (varia a seconda del tribunale) Copia della polizza di assicurazione Trova un corso on-line. Il modo più semplice è quello di tipo "difensivo di guida del Texas in linea" nel vostro motore di ricerca preferito sul computer. Che vi darà molte scelte. Ma, assicurarsi che la società si seleziona è accettata dallo Stato del Texas. corsi di guida difensiva in Texas sono sorvegliati dal Texas Education Agency. Tutti questi corsi deve durare sei ore. Se si trova uno che dice che non dura sei ore, è troppo bello per essere vero. Al termine il corso di guida difensiva si riceverà un certificato di completamento. Bisogna trasformare questo certificato nell'ufficio del Clerk Texas County. Dal momento in cui si riceve il permesso di partecipare al corso, avete 90 giorni di tempo per girare nel certificato. Molti corsi di guida difensiva online che consentono 90 giorni di tempo per partecipare al corso. 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Si noti che le prove 'proteina esistenza' non fornisce informazioni sulla precisione e correttezza della sequenza (s) visualizzato. & Lt; / p> & lt; p> & lt; a href = '.. / manuale / protein_existence' target = ' _top '> Altro. & Lt; / a> & lt; / p> Selezionare una sezione a sinistra per vedere i contenuti. & Lt; p> Fornisce tutte le informazioni utili sul proteina, la conoscenza per lo più biologici. & Lt; / p> & lt; p> & lt; a href = '.. / manuale / function_section' target = '_ top'> Altro. & Lt; / a> & lt; / p> I Funzione Mostre attività antimicrobica contro i batteri Gram-positivi Staphylococcus aureus e S. pyogenes, batteri Gram-negativi P. aeruginosa e E. coli e le C. albicans lievito. Uccide multiresistenti S. aureus e E. faecium resistenti alla vancomicina. Non è stata osservata una significativa attività emolitica. 1 pubblicazione & # Xd; & Lt; p> Informazioni a cura manualmente per i quali non è pubblicato evidenza sperimentale. & Lt; / p> & # xd; & # Xd; & # Xd; & Lt; p> & lt; a href = "/ manuale / evidenze # ECO: 0000269"> Più ... & lt; / a> & lt; / p> affermazione manuale sulla base di esperimento I Citata per: sequenza nucleotidica [MRNA], PROTEINA SEQUENZA DI 23-67. FUNZIONE, il tessuto SPECIFICITA ', induzione, SPETTROMETRIA DI MASSA. & # Xd; & Lt; p> & lt; a href = "http://www. geneontology. org/"> Gene Ontology (GO) & lt; / a> progetto prevede una serie di gerarchico vocabolario controllato suddiviso in 3 categorie: & lt; / p > & lt; p> & lt; a href = '.. / manuale / gene_ontology' target = '_ top'> Altro. & Lt; / a> & lt; / p> GO - processo biologico i & # Xd; & Lt; p> dedurre da Mutant fenotipo & lt; / p> & # xd; & # Xd; & # Xd; & Lt; p> Descrive le annotazioni che sono conclusi da guardare variazioni o modifiche in un prodotto del gene, come mutazioni o livelli anormali e include tecniche quali fori, l'iperespressione, esperimenti anti-senso e l'uso di inibitori della proteina specifici. & Lt; / p> & # xd; & # Xd; & # Xd; & Lt; p> Maggiori informazioni nel & lt; a href = "http://geneontology. org/page/guide-go-evidence-codes#imp"> GO prove guida il codice & lt; / a> & lt; / p> dedurre dalla mutante i fenotipo 21115716 & # Xd; & Lt; p> tracciabile Autore Dichiarazioni & lt; / p> & # xd; & # Xd; & # Xd; & Lt; p> Utilizzato per le informazioni da articoli di revisione in cui gli esperimenti originali sono rintracciabili attraverso questo articolo e anche per le informazioni dai libri di testo o dizionari. & Lt; / p> & # xd; & # Xd; & # Xd; & Lt; p> Maggiori informazioni nel & lt; a href = "http://geneontology. org/page/guide-go-evidence-codes#tas"> GO prove guida il codice & lt; / a> & lt; / p> autore tracciabile dichiarazione che ho 11085990 & # Xd; & Lt; p> UniProtKB Parole costituiscono un & lt; a target = "_ top" href = "/ parole chiave"> vocabolario & lt controllata; / a> con una struttura gerarchica. Parole riassumono il contenuto di una voce UniProtKB e facilitare la ricerca di proteine ​​di interesse. & Lt; p> & lt; a href = '/ help / keywords' target = '_ top'> Altro. & Lt; / a> & lt; / p> Parole chiave - molecolare funzione I banche dati di enzimi e pathway Reactome - una knowledge base di percorsi e dei processi & lt biologici; br /> & lt; a href = '/ database / 88'> Più .. & lt; / a> Reactome i database famiglia / gruppo di proteine Defensive Driving League City TESTIMONIANZE Caratteristiche del corso Stato, Corte, e la madre-in-legge approvata Corso I certificati inviati in 1 giorno lavorativo! Ha insegnato dai comici professionali 10% di Sconto Assicurazione auto Nuovi film in DVD con suono surround Opzioni pronta consegna disponibili Opzioni di pagamento Classroom prezzo è di soli $ 29.00 Dollari! Si accettano assegni! Cash accettato! Vaglia accettato! Carte di credito con $ 1,00 Convenienza carica! 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